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細(xì)胞培養(yǎng)中常見的『液體試劑』

更新時(shí)間:2023-03-18  |  點(diǎn)擊率:891

細(xì)胞的體外培養(yǎng)技術(shù),是細(xì)胞生物學(xué)的一項(xiàng)基本實(shí)驗(yàn)。了解細(xì)胞培養(yǎng)的目的、實(shí)驗(yàn)材料、實(shí)驗(yàn)步驟等知識(shí),有利于培養(yǎng)出更健康的細(xì)胞,更好地應(yīng)用于科學(xué)實(shí)驗(yàn)中。

本期內(nèi)容,我們來(lái)探討細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,常見的液體試劑。

培養(yǎng)基是細(xì)胞賴以生存的液體環(huán)境的提供者,人工模擬細(xì)胞在體內(nèi)生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境,為細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)、促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。

基礎(chǔ)培養(yǎng)基是水、無(wú)機(jī)鹽、碳水化合物、維生素、氨基酸等成分的混合溶液。一般情況下,會(huì)通過(guò)補(bǔ)加血清或是各類不同等成分,配制為適合不同細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖的培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)中,可以通過(guò)ATCC查詢所培養(yǎng)的細(xì)胞適合什么類型的培養(yǎng)基,配制比例是多少。

培養(yǎng)基可以是粉劑或液體,英文均為medium。

培養(yǎng)基有助于保持培養(yǎng)體系中的pH值和滲透壓平衡,是控適宜細(xì)胞生長(zhǎng)的重要且復(fù)雜的因素。

對(duì)于一些培養(yǎng)難度較大的細(xì)胞,選擇一款能夠與細(xì)胞“契合"的培養(yǎng)基,有利于維持細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定。另外,培養(yǎng)基使用的便捷程度,也是不可忽視的一個(gè)方面。

Ausbian干細(xì)胞培養(yǎng)基,是在含微量胎牛血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,通過(guò)添加一種人永生化干細(xì)胞系的條件培養(yǎng)基混合組成,是一款即用型培養(yǎng)基。解凍后即可參與干細(xì)胞培養(yǎng),無(wú)需二次配制,方便快捷且高效。

根據(jù)供體動(dòng)物或采血時(shí)間的差異,血清分為許多種類。用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的血清主要有牛血清、馬血清、豬血清等。其中,牛血清的使用更為廣泛,胎牛血清憑借其豐富的營(yíng)養(yǎng),支持多種細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖的特性,深受科研人員喜愛(ài)。

合格的胎牛血清,應(yīng)采自5-8個(gè)月胎齡牛胚胎中的胎血,內(nèi)毒素含量也應(yīng)嚴(yán)格控制,過(guò)高的內(nèi)毒素會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞提前衰老、凋亡,細(xì)胞狀態(tài)變差,相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也容易產(chǎn)生波動(dòng)。

Ausbian進(jìn)口特級(jí)胎牛血清,采自5-8月齡牛胚胎,澳洲血源,出廠前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格質(zhì)控,并附詳細(xì)《檢測(cè)報(bào)告》,內(nèi)毒素含量≤3EU/ml,盡可能降低內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞的影響,為細(xì)胞創(chuàng)造一個(gè)健康的生長(zhǎng)環(huán)境,有利于實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定。

在無(wú)菌的理想狀態(tài)下,是沒(méi)有必要添加抗生素的。但由于實(shí)驗(yàn)環(huán)境在實(shí)際中沒(méi)要辦法做到真正的無(wú)菌,所以很多科研人員會(huì)“習(xí)慣性、預(yù)防性"地添加抗生素。

但事實(shí)上,抗生素并不是「免死金牌」,真菌、支原體這些污染是它不能夠?qū)沟?,甚至濫用還會(huì)適得其反。

一些文獻(xiàn)中表明:β-內(nèi)酰胺類抗生素及氨基糖甙類抗生素,對(duì)真核細(xì)胞培養(yǎng)有抑制增殖作用,在原代細(xì)胞和干細(xì)胞等難養(yǎng)細(xì)胞上尤其明顯。有研究人員發(fā)現(xiàn),抗生素(雙抗:青霉素和鏈霉素)的使用影響人體肝細(xì)胞中基因表達(dá)與基因調(diào)控。

雖然抗生素對(duì)真核細(xì)胞生長(zhǎng)的影響機(jī)制至今尚未明確,但是為了細(xì)胞更好的生長(zhǎng),實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加準(zhǔn)確和穩(wěn)定,在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中盡量不要隨意使用。實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境衛(wèi)生需要精心維護(hù)。

定期清潔、規(guī)范操作都是盡量避免實(shí)驗(yàn)污染的好方法。德國(guó)MB公司的支原體污染祛除試劑

細(xì)胞培養(yǎng)中,還可能會(huì)用到一些其他液體試劑。

比如用于細(xì)胞消化的胰酶,也叫細(xì)胞消化液體。常用的胰酶溶液是0.25% 、0.125%的胰蛋白酶與0.02%的二乙胺四乙酸二鈉(EDTA) 調(diào)配的溶液。該消化液可以使細(xì)胞脫離粘附表面,形成單個(gè)細(xì)胞。

酚紅指示劑,一種用于指示pH溶液,中性為紅色,酸性為黃色,堿性為紫色。但并不是所有培養(yǎng)基都要添加酚紅,應(yīng)根據(jù)細(xì)胞種類、實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑贈(zèng)Q定

HEPES,細(xì)胞培養(yǎng)中很常見的一種Buffer;谷氨酰胺,可以作為細(xì)胞的能量來(lái)源,參與蛋白質(zhì)的合成和能量代謝。但谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,應(yīng)在-20 ℃冰凍保存,添加到液體培養(yǎng)基后,在4℃保存,不要超過(guò)1周。


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