1、淋巴細(xì)胞的分離

取肝素抗凝血1m1 加Hanks 液1m1 稀釋后，沿管壁徐徐滴流疊加盛有2m1 淋巴細(xì)胞分離液的試管內(nèi)(注意勿與分離液混合，然后2000r／min 水平離心20min，管內(nèi)分為4 層，自上而下依次為血漿，單個(gè)核細(xì)胞，顆粒白細(xì)胞、紅細(xì)胞。

用毛細(xì)管伸至單個(gè)核細(xì)胞層中(位于細(xì)胞分離液與血漿的界面上)，沿管壁輕輕吸出全部細(xì)胞。然后用Hanks 液洗兩次，每次2000r／min 離心10min，最后用RPMI l640 培養(yǎng)液將細(xì)胞配成2×10 6 ／m1 的細(xì)胞懸液備用。

2、T 細(xì)胞及B 細(xì)胞的分離

將淋巴細(xì)胞懸液通過尼龍棉柱，B 細(xì)胞粘附于尼龍棉上，T細(xì)胞則不粘附，先用RPMI l640 培基洗脫尼龍棉柱，流下的細(xì)胞懸液含有豐富的T 細(xì)胞。然后用力反復(fù)擠壓尼龍柱、擠出粘附在尼龍 棉上的B 細(xì)胞，并用少量的RPMI l640 培基洗脫，此細(xì)胞懸液含有豐富的B 細(xì)胞。尼龍柱(塑料管)的長(zhǎng)短和尼龍棉的多少，視分離細(xì)胞的多少而定。

3、CD4 細(xì)胞及CD8 細(xì)胞的分離

（1）CD4 細(xì)胞的分離：將一定量的T 細(xì)胞懸液通過一根SephDdexC—10 柱，然后用少量的RPMll640 培養(yǎng)洗滌，收獲的細(xì)胞懸液約含85％的CD4 細(xì)胞。

（2）CD8 細(xì)胞分離：用Tris 緩沖液稀釋羊抗鼠IgG(濃度為10μg／m1)包被一平皿表面，然后放置4℃過夜，沒有包被上的抗體用PBS 洗凈。

然后將已標(biāo)記有抗CD8 單克隆抗體的T 細(xì)胞(細(xì)胞濃度為1×l0 7 ／m1)3m1 加入上述的平皿內(nèi)，4℃放置2 小時(shí)，用PBS 輕輕洗凈末粘附的細(xì)胞，然后用毛細(xì)管加入10m1 PBS 吹打。收集的脫落細(xì)胞經(jīng)洗滌后懸浮在RPMI l640 培基中備用。CD4 細(xì)胞亦可用此法分離。

4、單核巨噬細(xì)胞的分離

單核巨噬細(xì)胞有粘附塑料或玻璃表面的特性，而淋巴細(xì)胞則無(wú)此特性，借此可將這兩類細(xì)胞分開，其方法簡(jiǎn)述如下。

將待分離的細(xì)胞懸液(如實(shí)物動(dòng)物的腹腔液)加入適當(dāng)大小的塑料或玻璃平皿內(nèi)，置于37℃ C02 溫箱內(nèi)溫育1 小時(shí)，然后用RPMI 1640 培基輕輕漂洗平皿表面，去除非粘附細(xì)胞，再將粘附有細(xì)胞的平皿表面用上述培基輕輕洗刷，收集粘附的單核巨噬細(xì)胞。如果要獲得純度較高的單核巨噬細(xì)胞，可重復(fù)上述過程。

科研實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞要養(yǎng)好，就要用好血清，如Ausbian®特級(jí)胎牛血清，它適合各種細(xì)胞培養(yǎng)，尤其適合難養(yǎng)細(xì)胞，如：干細(xì)胞、肝細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞，原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)染細(xì)胞等。