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雜交瘤培養(yǎng)基推薦使用方法

更新時間:2017-08-04  |  點擊率:1778

雖然,雜交瘤細胞的生長依賴于外源性營養(yǎng)物質(zhì)的補充,如:血清、白蛋白、水解產(chǎn)物、蛋白質(zhì)等,但是,仍可應用化學合成的TurboDoma培養(yǎng)基進行細胞培養(yǎng)??傊?,你目前使用的培養(yǎng)基中營養(yǎng)補充成分越少,細胞從這種蛋白依賴型培養(yǎng)基過渡到適應TurboDoma*無蛋白培養(yǎng)基的速度就會越快。本文締一生物/締一生物為您來分析雜交瘤培養(yǎng)基推薦使用方法。


1.通過離心過濾(380轉(zhuǎn),3分鐘)采集細胞后,加入TurboDoma培養(yǎng)基,使細胞能夠再次懸浮,且細胞密度應達到1 x 105/ml,如:將2 x 106 細胞接種在75 cm2細胞培養(yǎng)瓶中,加入20 ml TurboDoma培養(yǎng)基。如果,培養(yǎng)基的pH值低于支持細胞生長的范圍,即pH值< 7.0,培養(yǎng)基的顏色從橘紅變?yōu)榈S,這時,需另加入20 ml新鮮培養(yǎng)基,使培養(yǎng)基體積增大一倍。上述情況通常在接種后3-4天出現(xiàn)。

2.注意觀察細胞生長時的狀態(tài)。細胞培養(yǎng)4-5天內(nèi),由于細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的丟失,會導致大量細胞的死亡。但是,仍有一些代謝活躍的細胞能夠很快適應新的生長環(huán)境。

3.正在生長的細胞由于乳酸的產(chǎn)生會引起pH值的下降。當培養(yǎng)基的pH值低于支持細胞生長的范圍時,倒出50%的培養(yǎng)基,然后,再加入50%新鮮的培養(yǎng)基,繼續(xù)進行培養(yǎng)。如果更換培養(yǎng)基的間隔時間越來越短,例如:細胞表現(xiàn)出旺盛的代謝能力,那么,就可增加新鮮培養(yǎng)基的量,直至將剩余的培養(yǎng)基全部換為新的培養(yǎng)基。

4.為了細胞增殖能夠達到滿意的效果,必須保證培養(yǎng)過程中使用相同的培養(yǎng)瓶。而且,我們建議:在細胞適應TurboDoma培養(yǎng)基的過程中,要頻繁地更換培養(yǎng)液,不要急于傳代。細胞需要逐漸適應新的培養(yǎng)環(huán)境。

5.懸浮細胞生長時,zui初,可能會形成50個細胞左右的細胞團,大小不一。漸漸地,細胞團慢慢消失,細胞逐漸擴散增殖。對于懸浮細胞的傳代培養(yǎng),可通過稀釋培養(yǎng)液或加入新鮮培養(yǎng)基來進行。

注意:細胞培養(yǎng)過程中,為了能夠使細胞在24小時內(nèi)進入正常生長周期,必須等細胞生長密度達到一定程度時才可分瓶,進行傳代培養(yǎng)!

綜上所述,您是不是已經(jīng)對雜交瘤培養(yǎng)基推薦使用方法,有所了解。如果還有其他疑問,請咨詢締一生物/締一生物資深專家。

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